六、痰涂片抗酸染色检查注意事项

痰涂片抗酸染色检查要注意预防假阳性和假阴性结果的产生。假阳性是指将阴性涂片错误判读为阳性，假阴性是指将阳性涂片错误判读为阴性。属于技术因素的影响要通过一系列实验室内和实验室间的质量控制不断改善。

（一）假阳性结果的预防措施

1、必须使用新的载玻片进行痰涂片检查。

2、每个标本均使用一个新竹签完成制片涂抹。

3、所有染液均经过过滤。

4、染色时玻片彼此之间保持一定距离，相互彻底分隔开。

5、严禁使用染色缸将玻片放置一起染色。

6、染色时勿使玻片上的染液干燥。

7、滴加镜油时，严禁容器滴口直接接触玻片痰膜。

8、严禁物镜镜头直接接触玻片痰膜。

9、完整、准确的标注痰盒、玻片和实验室登记本的各项内容。

10、登记前、后对检验单和标本盒上的标注进行仔细核对。

11、认真按照要求读片，准确记录和报告结果。

（二）假阴性结果的预防措施

1、确认标本是痰而非唾液。

2、确认每份标本至少有3 ml。

3、选择脓样、干酪样、粘液分泌物涂抹制备玻片。

4、制备玻片时标本涂抹均匀，不要太厚或太薄。

5、使用高质量染料、严格按照配方配制染液。

6、严格按照操作程序完成染色过程。

7、判断结果为“阴性”前，必须阅读规定要求的视野数。

8、作为对照，可采用已知结果为阳性的玻片，完成染色镜检过程。

9、完整、准确地标注痰盒、玻片和实验室登记本。

10、登记前对检验单和标本盒上的标注进行仔细核对。

11、准确记录和报告结果。

七、痰玻片的保存

（一）镜检后的涂片应及时用浸满二甲苯的擦镜纸彻底去除涂片上的镜油。

（二）再次核对实验室登记本与每张涂片实验序号。

（三）严禁在涂片上标记镜检的阴、阳性结果。

（四）按实验室登记本序号连续排列全部涂片，存放于玻片盒内。

（五）涂片保存与实验室登记本记录应保持一致。初诊病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出两个空位置，以备第二张、第三张涂片检查后放入。

（六）保存近期3个月的全部痰涂片待各级实验室质量控制抽检，如果年涂片量不足500张，必须全部保存。

（七）装满涂片的玻片盒，需用标签注明涂片实验序号区间和日期区间，以便日后盲法复检或现场评价时抽样。

八、实验室管理

（一）显微镜日常维护

显微镜作为发现涂片阳性病人的重要设备，实验室工作人员应正确使用并给予正确维护，以保证其正常工作和延长使用寿命。在使用和维护显微镜时应特别遵守下列要点：

1、显微镜应放置在干燥、无尘和通风的环境中。如果显微镜一段时期内停止使用，应拆开并放置在原包装盒内，并放置有效的干燥剂。

2、使用前和使用后必须使用擦镜纸彻底清洁物镜。

3、严禁物镜镜头直接接触玻片上痰膜。

4、使用油镜时，只能使用细螺旋调节焦距。

5、使用电光源显微镜时，注意电压和电流是否与仪器要求相匹配。

（二）耗材供应与管理

为保障痰涂片检查工作能够连续不断开展，应储存一定数量的实验耗材和相应试剂，储备量可根据工作量来进行计算，一般应准备比平均工作量高20％的相应耗材和试剂。染色试剂应由省结核病参比实验室或经省级结核病参比实验室进行了质量控制的地（市）级结核病参比实验室组织统一配制和供应，其它耗材可根据当地情况由省、地或县统一供应。各项物资、耗材按照需要供应，并保证达到质量要求。

（三）实验室人员安全防护

1、严格遵守实验室安全操作规程，实验室的技术人员必须经过生物安全培训后方可上岗。

2、严格遵守实验室安全操作规程，警惕分枝杆菌气溶胶的产生。

3、实验室应严格限制非实验室人员进入，减少实验室内外交叉生物污染。完成实验工作离开实验室，要关好门窗。

4、进入实验室，尽量避免携带非必需物品。实验台上不放任何与实验无关的物件或私人用品。

5、工作人员进入实验室，应穿工作服并注意着装整齐，操作时应戴口罩、帽子和手套，长发者须将头发装束在帽子内。

6、实验室内应保持肃静，试验过程中禁止一切与试验无关的活动，以保证集中精力完成实验操作。

7、实验室内禁止吸烟、饮食及用嘴湿润铅笔或标签等，也不要以手抚摩头面部等。

8、实验前须开启紫外灯对实验室和操作区域进行照射消毒1小时以上；实验结束后，开启紫外灯对操作区和实验室进行照射消毒2小时以上。

9、实验结束后，操作人员要用清洁剂（或肥皂）和清水充分洗净。

10、每次实验操作终止后，必须清理好实验台，所有物品归位并用70%酒精或3-5%石碳酸等有效消毒剂擦洗实验台和地面。

11、实验室中的生物危险物要根据检查项目和性质的不同，局限在相应的实验室或试验区域内，不得随意将其带到其它区域进行。

（四）污物消毒与处理

1、痰标本、被污染的一次性用品及实验室垃圾应经高压灭菌后丢弃，或者使用专用的焚烧炉或固定的垃圾坑进行焚烧。

2、每次完成检查后，操作台和实验区域内经紫外灯近距离照射消毒2小时以上。

3、实验过程中，如标本被打翻污染了操作台或地面，应以大于污染面积的纱布或卫生纸吸满5%的苯酚溶液或70%酒精，覆盖污染区，30分钟后方可移去，再经紫外线近距离照射。

附表：

1、乡镇卫生院痰检人员培训记录表

2、基本情况调查表

3、检验单参考式样

4、结核病细菌学实验室登记本